Myriam Restrepo  este es mi aporte. Gracias.

LABORATORIO 3

PRODUCCION DE AMILASA POR MICROBIOS DEL SUELO

MATERIALES UTILIZADOS

1 g de tierra seca, diferentes tipos de suelo

9 ml de agua peptona da o solución salina

Cajas Petri 15 mm con nutriente de agar (0,2 de almidón soluble)

Tubos de Ensayo

Erlenmeyers

Pipetas de vidrio

Solución de Yodo

PROCEDIMIENTO

1,086 G tierra + 9 ml de agua peptona 〖10〗^(-1) 〖10〗^(-2) 〖10〗^(-3)

〖10〗^(-4) 〖10〗^(-5) 〖10〗^(-6) 37 ºC por 24 hr+ 2,5 ml de lugol

A nuestro grupo le correspondió 〖10〗^(-5)

Se incubó a 30ºC 24 horas +solución de yodo para detectar la presencia almidón

Número de colonias obtenidas. No se obtuvo ninguna colonia, no coloración azul violeta para identificación de almidón ni roja para identificación de glicógeno y dextrinas. La 〖10〗^(-4), fue la anterior si tuvo resultados.

POSIBLES CAUSAS POR LAS QUE NO SE OBTUVO RESULTADOS:

Es posible que las bacterias presentes en la muestra no pudieran crecer debido a fallas en las condiciones de: pH, temperatura, medio de cultivo, tiempo. En este caso pudo ser por error en el tiempo de incubación. Por lo que el recuento fue nulo.

O Por un posible error en el procedimiento. Cada colonia se forma a partir de por lo menos un microorganismo. Y en nuestro experimento no se formó nada.

por el tipo de microorganismo, a temperatura óptima, tienen tiempos de generación muy cortos otros crecen más lentamente con tiempos de generación que necesitan de varias horas.

CONCLUSIONES

El suelo es la fuente más importante de microorganismos. Con capacidad aminolítica, lipolítica, antimicrobiana y capacidad de síntesis de melanina.

Los antibióticos son también un producto de las enzimas.

Cada organismo produce variedad de enzimas, las que están participan en procesos celulares. Algunos microorganismos las producen en cantidades más grandes y las excretan al medio.

Cada actividad enzimática le permite al microorganismo competir contra otros microorganismos por nutrientes, por la capacidad de degradación de compuestos.

CUANTIFICACIÓN DE AZÚCARES

E.Coli 10%

90%

Fructosa saca glucosa

a 37ºC

1ml

blanco (fructosa) REFRIGERAR 4ºc

0 60 90 120….300

Nuestro grupo trabajo con fructosa. Esperar 1 hr. Luego cada ½ hora.

Pasar lectura por espectofotometría calibrar 600nm con s/n blanco

tiempo absorvancia

0 0,032

60 -0,05

90 0,091

120 0,036

150 -0,053

180 0,171

210 0,055

240 -0,045

270 -0,064

Y0= Y1+Y2+YN N= Numero de valores

N Y=Absorvancia

N=9

Y=0,173 (Suma de todas las absorvancia)

Hallamos desviación estándar:

σ = √1/N ∑_(i=0)^n▒〖(Yi-Yo〗)2

σ=√ 1/9 9 (0.032-0,2)

σ=√ 0,11111 9 (0.032-0,2)

σ=0,3333 9 (-0,168)

σ=0,3333 9 (-0,168)

σ= 2,9997(-0,168)

σ= -0,5039496

+ lugol (Diluir 1.2 ml) + 23 ml H20 Por goteo lento 5 min. Se observò formación de colonias halo rojizo.

Nº Colonias / Diametro del halo

2/5mm = 0,4

EXTRACCION DE ADN

20 mul muestra + 480 mul H20 + Se calentó 5 min

Lectura 540 nm

CONCLUSIONES

Se observó que la temperatura incrementó tanto la producción de fructosa, la temperatura condiciona la producción y liberación de enzima al medio para la polimerización de dextrano.

Según los resultados encontrados en los ensayos preliminares y en la fase final, se observó que el mejor sustrato acorde con las condiciones nutricionales y con el cual se presentó un comportamiento.

BIBLIOGRAFIA

Universidad Nacional del Nordeste Trabajo Práctico Nº 5 FACULTAD DE AGROINDUSTRIAS Estudio cuantitativo de bacterias Microbiología Farmacia Año 2006. Recuperado de: http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/tp5.pdf

Á. N. Ramona; R. P, Bernarda; H. M, Rómulo; C, Marluy. “Contenido de azúcares totales, reductores y no reductores” Multiciencias, vol. 12, núm. 2, abril-junio, 2012, pp. 129-135 Universidad del Zulia. Recuperado de:

http://www.redalyc.org/pdf/904/90424216002.pdf